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辛基-琼脂糖凝胶CL-4B图片
产品货号:
QN4071
中文名称:
辛基-琼脂糖凝胶CL-4B
英文名称:
Octyl-Sepharose CL-4B
产品规格:
25ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
辛基-琼脂糖凝胶CL-4B是琼脂糖凝胶CL-4B的辛基衍生物,含有疏水性正辛基。具有较好的流速,在配基和骨架间的键很稳定,可反复在pH7.0、120℃热压消毒。纯化疏水性较弱的蛋白质或膜蛋白,因其经去污剂处理后仍有强疏水性。

技术参数:
基质:4%琼脂糖凝胶
配基:正丁烷基n-Octyl
配基密度:40μmol/mL
颗粒大小:45~165μm
最大流速:50cm/h
每毫升结合量:15~20mgHSA
操作温度:室温
保存条件:4~28℃

使用方法:
1.装柱
①nbsp;将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。
②nbsp;根据柱子大小取所需凝胶的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1比例)配成匀浆。
③nbsp;将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
④nbsp;用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意不要使用气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
⑤nbsp;打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2.平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液,如:0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3.上样
①nbsp;样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心、过滤后上柱;
②nbsp;一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡洗液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目标产品。
③nbsp;介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。温度越大、盐浓度越高或样品组分疏水性越强,介质对组分吸附越牢。
4.洗脱
疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液,如:0.02~0.05mol/L的PBS。
5.再生
一般用低盐浓度的缓冲液洗,洗10倍以上柱体积,接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活的蛋白或者脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
6.在位清洗
①nbsp;对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M NaCl去除。
②nbsp;对沉淀蛋白、以疏水作用结合的蛋白或者脂类物质,可用1M NaOH去除。
③nbsp;对强疏水性结合的蛋白、脂类等,可用4-10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。
清洗完毕后,用至少3倍柱体积缓冲液平衡柱子。
7.去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或者用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下步骤去除:
①nbsp;2倍柱体积的70%的乙醇;
②nbsp;2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5
③nbsp;1倍柱体积4M尿素
④nbsp;3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl;
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
8.消毒
用0.5~1.0M NaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。
辛基-琼脂糖凝胶CL-4B注意事项
①nbsp;密封贮存于4~28℃(保存溶液为20%乙醇+0.1M醋酸钠),通风、干燥的地方,不能冷冻。用过的柱子贮存于4℃(20%乙醇)。
②nbsp;在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。
相关搜索:辛基-琼脂糖凝胶CL-4BOctyl-Sepharose CL-4B
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